Plasmide CRISPR/Cas9 KO NDRG1 (m): sc-421841
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- NDRG1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique NDRG1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NDRG1 Antibody (B-5): sc-398291
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO NDRG1 (m) | sc-421841 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ndrg1 code pour NDRG1, une protéine cytoplasmique induite par le stress cellulaire et par des signaux de différenciation, qui contribue à la régulation de la croissance cellulaire, de l’engagement de lignée et des réponses à l’hypoxie. Dans les cellules de souris, NDRG1 a été associée à des voies impliquées dans l’homéostasie du fer, le trafic vésiculaire et l’organisation du cytosquelette, avec des effets dépendant du contexte sur les programmes de prolifération et de motilité. NDRG1 est également liée à la biologie de la myéline dans le système nerveux périphérique et a été étudiée dans des modèles de neurodégénérescence et de neuropathies démyélinisantes. Des altérations de l’expression de Ndrg1 ont en outre été explorées en biologie tumorale et dans des phénotypes associés à la métastase, ce qui soutient sa pertinence pour l’étude de la signalisation et des mécanismes d’adaptation au stress.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NDRG1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ndrg1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ndrg1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ndrg1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NDRG1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ndrg1 pour l'étude de la signalisation de NDRG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ndrg1 essentiels à la fonction de NDRG1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ndrg1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le NDRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NDRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ndrg1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le NDRG1 plasmide HDR (m) et le NDRG1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ndrg1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ndrg1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.