NDR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402716-ACT

STK38 kodiert NDR1, eine Serin/Threonin-Kinase aus der NDR/LATS-Familie, die als zentraler Effektor in Hippo-verwandten Signalwegen wirkt und die Koordination von Zellproliferation, Apoptose und Gewebehomöostase unterstützt. NDR1 integriert upstream-Signale von MST-Kinasen und Gerüstproteinen, um die Zentrosomenduplikation, den mitotischen Verlauf und die Organisation des Zytoskeletts zu regulieren, und verknüpft damit Kinase-Signale mit der Kontrolle des Zellzyklus sowie mit Polaritätsprogrammen. Darüber hinaus trägt es über die Modulation von Transkriptions- und Kinase-Netzwerken zu Stress- und angeborenen Immunantworten bei, mit nachgelagerten Effekten auf Zellüberleben und entzündliche Signalwege. Eine fehlregulierte NDR1-Aktivität oder gestörte Vernetzung im Signalweg wurde in experimentellen Systemen mit aberranter Wachstumskontrolle und Phänotypen genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und Mechanismen neurodegenerativer Erkrankungen relevant sind.

NDR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STK38-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NDR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STK38-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STK38-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NDR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STK38-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NDR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NDR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STK38-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.