Plasmide CRISPR/Cas9 KO NCOAT (m): sc-429251

Présentation

Mgea5 code pour NCOAT (également appelé O‑GlcNAcase), une enzyme clé qui retire l’β‑N‑acétylglucosamine O‑liée (O‑GlcNAc) des résidus sérine et thréonine des protéines nucléaires et cytoplasmiques. Avec l’O‑GlcNAc transférase, NCOAT régule le cycle dynamique de l’O‑GlcNAc, qui relie la détection des nutriments à la signalisation dépendante de la phosphorylation, influençant la transcription, la progression du cycle cellulaire, la protéostasie et les réponses au stress. L’activité de NCOAT affecte des voies telles que la signalisation insuline/AKT, la régulation de la chromatine et le contrôle qualité des protéines en modulant les niveaux d’O‑GlcNAc sur des facteurs de transcription, des kinases et des protéines du cytosquelette. Une homéostasie de l’O‑GlcNAc dérégulée a été associée à des phénotypes liés au métabolisme et à la neurodégénérescence, ce qui fait de Mgea5 une cible utile dans des modèles murins de signalisation et de régulation épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NCOAT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mgea5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mgea5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mgea5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NCOAT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mgea5 pour l'étude de la signalisation de NCOAT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mgea5 essentiels à la fonction de NCOAT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mgea5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NCOAT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NCOAT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mgea5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NCOAT plasmide HDR (m) et le NCOAT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mgea5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mgea5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.