NBR1 Double Nickase Plasmid (m): sc-421827-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NBR1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NBR1 Double-Nickase-Plasmid (m) und NBR1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Nbr1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NBR1: sc-130380
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NBR1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421827-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NBR1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421827-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Nbr1 kodiert NBR1, einen selektiven Autophagie-Rezeptor, der ubiquitiniertes Cargo über seine UBA-Domäne erkennt und über ein LIR-Motiv mit LC3/GABARAP-Proteinen interagiert, um die Zielsteuerung zum Autophagosom zu fördern. NBR1 wirkt zusammen mit p62/SQSTM1 in der Aggrephagie und trägt zur Proteostase, zur Qualitätskontrolle von Organellen sowie zu Stressantworten bei, die Zellüberleben und inflammatorische Signalwege beeinflussen. Über Interaktionen mit ubiquitinabhängigem Transport sowie Autophagie–Lysosom-Pathways beeinflusst NBR1 den Abbau von Proteinaggregaten und beschädigten zellulären Komponenten. Eine Fehlregulation dieser Prozesse ist relevant für die Forschung zu Neurodegeneration, metabolischem Stress und Tumorbiologie, in denen ein beeinträchtigter autophagischer Flux und aberrante Ubiquitin-Signalgebung häufige Merkmale sind.
NBR1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Nbr1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Nbr1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Nbr1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Nbr1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.