Plásmido CRISPR de Activación (h) NBR1: sc-402592-ACT

NBR1 humano (neighbor of BRCA1 gene 1) codifica un receptor de autofagia selectiva que reconoce carga ubiquitinada y la conecta con autofagosomas positivos para LC3 mediante interacciones dependientes de LIR. NBR1 coopera con SQSTM1/p62 en la agrefagia, la mitofagia y el control de la proteostasis, favoreciendo el recambio de agregados proteicos y orgánulos dañados durante el estrés celular. A través de estas funciones, NBR1 contribuye a la regulación de la señalización inmunitaria innata, las respuestas al estrés oxidativo y el control de calidad dependiente de lisosomas. La autofagia asociada a NBR1 desregulada se ha implicado en vías relevantes para la neurodegeneración, la biología del cáncer y fenotipos inflamatorios, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del flujo autofágico y la señalización por ubiquitina.

NBR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NBR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NBR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NBR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NBR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NBR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NBR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NBR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NBR1 en células tumorales con expresión de NBR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.