Plásmido CRISPR de Activación (h) NBC4: sc-412900-ACT

El gen humano **SLC4A5** codifica el cotransportador electroneutro de sodio y bicarbonato **NBC4**, un transportador de membrana que media el flujo de HCO₃⁻ acoplado a Na⁺ para sostener la regulación del pH intracelular, la homeostasis del bicarbonato y el transporte iónico epitelial. Al modular la capacidad tampón citosólica y el movimiento transepitelial de bicarbonato, NBC4 contribuye a procesos como el manejo de electrolitos en riñón e intestino y las respuestas celulares al estrés ácido–base. La actividad alterada de SLC4A5 se ha investigado en el contexto de un transporte iónico desregulado y de la señalización dependiente del pH, que puede influir en la excitabilidad, el metabolismo y la homeostasis tisular. Estas propiedades hacen de SLC4A5 una diana útil para estudiar la biología de los transportadores de la familia SLC, la energética del transporte de membrana y las vías reguladoras ligadas al pH.

NBC4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC4A5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NBC4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC4A5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC4A5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NBC4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC4A5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NBC4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NBC4 en células tumorales con expresión de SLC4A5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.