Partículas Lentivirales de Activación (m) Na⁺ CP type IIIα: sc-422820-LAC

Scn3a codifica en el ratón la subunidad α del canal de sodio dependiente de voltaje Na+ CP tipo IIIα (Nav1.3), una proteína de membrana formadora de poro que permite el inicio y la propagación del potencial de acción en células excitables. Al mediar una entrada rápida y transitoria de Na+, Nav1.3 contribuye a la despolarización de la membrana neuronal, a los patrones de disparo y a la excitabilidad de la red, integrándose con la homeostasis iónica y las vías de señalización dependientes de la actividad. La expresión de Scn3a se regula de forma dinámica durante el desarrollo y tras lesiones neurales, y la alteración de la actividad del canal se ha vinculado a fenotipos de hiperexcitabilidad relevantes para la epilepsia, el procesamiento del dolor y los trastornos del neurodesarrollo. Estas propiedades hacen de Scn3a una diana útil para desentrañar las contribuciones de los canales de sodio a la función de los circuitos y a los mecanismos de enfermedad impulsados por la excitabilidad en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral Na+ CP type IIIα (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Scn3a en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Na+ CP type IIIα (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Scn3a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Na+ CP type IIIα. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Scn3a y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.