Na+ CP type Iα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422818
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Na+ CP type Iα El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Na+ CP type Iα, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Na+ CP type Iα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422818 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Scn1a codifica la subunidad α del canal de sodio dependiente de voltaje Na+ CP tipo Iα, un determinante principal del inicio y la propagación de los potenciales de acción en las neuronas. Al regular las corrientes rápidas de entrada de Na+ en el segmento inicial del axón y en los nodos de Ranvier, modula los umbrales de disparo neuronal, la sincronización temporal de los potenciales de acción y la sincronía de la red. La función de Scn1a se entrecruza con el equilibrio excitación–inhibición, la señalización dependiente de la actividad y las vías de homeostasis iónica que influyen en la transmisión sináptica y la estabilidad de los circuitos. Las alteraciones genéticas y funcionales de SCN1A están fuertemente asociadas con la susceptibilidad a convulsiones y con fenotipos del neurodesarrollo, lo que la convierte en un locus clave para estudios mecanísticos en modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type Iα (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scn1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scn1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scn1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Na+ CP type Iα.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scn1a para la investigación de la señalización de Na+ CP type Iα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Scn1a críticos para la función de Na+ CP type Iα
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scn1a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Na+ CP type Iα CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Na+ CP type Iα CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scn1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Na+ CP type Iα (m) y el plásmido HDR Na+ CP type Iα (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scn1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scn1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.