Plasmide Double Nickase (h) NAGAT: sc-401118-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NAGAT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NAGAT Double Nickase (h) et le plasmide NAGAT Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ABO. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NAGAT | sc-401118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NAGAT | sc-401118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABO code la N‑acétylgalactosaminyltransférase (NAGAT), une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse le transfert de N‑acétylgalactosamine sur l’antigène H afin de générer le déterminant du groupe sanguin A sur les glycolipides et les glycoprotéines. Cette activité est au cœur de la glycosylation terminale au sein de la voie de sécrétion et façonne des épitopes glucidiques à la surface cellulaire qui influencent le trafic des protéines, l’organisation membranaire et la reconnaissance immunitaire. La variation génétique d’ABO est à l’origine des phénotypes de groupes sanguins ABO et a été associée à des différences dans la biologie des facteurs de coagulation et la signalisation inflammatoire, reliant ainsi la structure des glycannes à des processus pertinents pour la maladie dans des contextes vasculaires et immunitaires. ABO/NAGAT constitue donc un modèle largement utilisé pour disséquer comment des activités spécifiques de glycosyltransférases modulent la fonction des glycoprotéines et les interactions cellule–cellule.
NAGAT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ABO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ABO. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ABO. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ABO.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.