NaDC-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-422975-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NaDC-1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NaDC-1 Double Nickase Plasmid (m) e il NaDC-1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc13a2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NaDC-1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422975-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc13a2 codifica il cotrasportatore sodio-dipendente di dicarbossilati NaDC-1, un trasportatore della membrana apicale che accoppia il gradiente di Na+ all’assorbimento di intermedi del ciclo di Krebs come citrato, succinato e α-chetoglutarato. Nel tubulo prossimale renale del topo, NaDC-1 contribuisce al riassorbimento del citrato e quindi influenza i livelli di citrato urinario, l’omeostasi acido-base e la gestione dei sali di calcio. Regolando la disponibilità intracellulare di dicarbossilati, NaDC-1 può influenzare l’anaplerosi mitocondriale e i flussi della rete metabolica connessa al ciclo TCA. Un’alterazione della funzione di Slc13a2/NaDC-1 è stata collegata a fenotipi rilevanti per la formazione di calcoli renali, alla fisiologia del trasporto tubulare renale e ad adattamenti metabolici studiati in nefrologia e in modelli di metabolismo dei sistemi.
NaDC-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc13a2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc13a2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc13a2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc13a2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.