Plasmide CRISPR/Cas9 KO N6AMT2 (h): sc-406341

Présentation

EEF1AKMT1 code N6AMT2, une méthyltransférase de la lysine qui modifie des facteurs associés à la traduction et contribue à la protéostasie en ajustant la synthèse protéique et le contrôle qualité co‑traductionnel. N6AMT2 a été associée à la régulation de la fonction des ribosomes et, plus largement, du métabolisme de l’ARN, ce qui la relie aux programmes de croissance cellulaire et au contrôle traductionnel adaptatif en situation de stress. Une méthylation altérée de la machinerie de traduction peut remodeler les signaux en aval de la détection des nutriments et du stress protéotoxique, faisant d’EEF1AKMT1 un gène pertinent pour l’étude de la progression du cycle cellulaire, de l’apoptose et de l’adaptation métabolique. La dérégulation de la traduction et des mécanismes de contrôle dépendants des méthyltransférases est fréquemment observée en recherche sur le cancer et en neurobiologie, ce qui étaye l’exploration de N6AMT2 dans des phénotypes associés aux maladies, sans pour autant impliquer une utilité clinique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO N6AMT2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EEF1AKMT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EEF1AKMT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EEF1AKMT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine N6AMT2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EEF1AKMT1 pour l'étude de la signalisation de N6AMT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EEF1AKMT1 essentiels à la fonction de N6AMT2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EEF1AKMT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le N6AMT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le N6AMT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EEF1AKMT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le N6AMT2 plasmide HDR (h) et le N6AMT2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EEF1AKMT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EEF1AKMT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.