Plasmide Double Nickase (h) N-SMase: sc-405568-NIC

Le gène humain **SMPD2** code la sphingomyélinase neutre (N‑SMase), une enzyme associée aux membranes qui hydrolyse la sphingomyéline pour produire du céramide et de la phosphocholine, modulant ainsi la composition des sphingolipides et les sorties de signalisation. L’activité de la N‑SMase contribue à la régulation, dépendante du céramide, des réponses au stress, de la dynamique des microdomaines membranaires, du trafic endomembranaire et des interactions avec des programmes de signalisation apoptotiques et inflammatoires. En contrôlant le flux de céramide, **SMPD2** influence des voies liées au stress du réticulum endoplasmique et à l’homéostasie lipidique, avec des effets en aval sur la signalisation MAPK/NF‑κB et le transport vésiculaire. Un métabolisme des sphingolipides dérégulé impliquant **SMPD2** a été étudié dans des contextes tels que la neurodégénérescence, les dysfonctionnements métaboliques et l’adaptation au stress associée au cancer, ce qui soutient sa pertinence comme cible de recherche en biologie des maladies.

N-SMase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMPD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMPD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMPD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMPD2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.