N-Ras Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421960

Panoramica

Il gene Nras del topo codifica N-Ras, una piccola GTPasi associata alla membrana che cicla tra gli stati legati a GDP e a GTP per trasdurre segnali provenienti dai recettori tirosin-chinasici e da altri input a monte. N-Ras attivata ingaggia le principali vie effettrici di Ras, tra cui RAF–MEK–ERK (MAPK) e PI3K–AKT, coordinando proliferazione, differenziamento, dinamica del citoscheletro e sopravvivenza cellulare. Un controllo rigoroso dell’attività di N-Ras è essenziale per la normale segnalazione ematopoietica e dello sviluppo, e l’alterazione del flusso nelle vie di Ras è ampiamente rilevante sia per la trasformazione oncogenica sia per le risposte del microambiente infiammatorio. Nras rappresenta quindi un nodo chiave per analizzare il rimodellamento delle reti guidato da Ras e il crosstalk tra vie di segnalazione in modelli cellulari e di malattia nel topo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO N-Ras (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nras in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nras insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nras a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina N-Ras.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nras per lo studio della segnalazione di N-Ras, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nras critici per la funzione di N-Ras
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nras per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal N-Ras CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal N-Ras CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nras. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal N-Ras Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR N-Ras (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nras per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nras definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.