Myosin VIIB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421802

Descripción general

Myo7b codifica la miosina VIIB, una proteína motora basada en actina enriquecida en células epiteliales polarizadas, donde contribuye a la remodelación del citoesqueleto, al tráfico apical y al mantenimiento de la arquitectura de las microvellosidades. Mediante interacciones con filamentos de actina y complejos asociados a membrana, la miosina VIIB favorece el ensamblaje del borde en cepillo y la organización de proteínas de membrana implicadas en la absorción y la función de barrera. La alteración de procesos dependientes de MYO7B es relevante para la disfunción epitelial y la homeostasis intestinal modificada, lo que la convierte en una diana útil para estudiar la polaridad, la dinámica de las uniones celulares y la especialización de la superficie. Los modelos murinos de Myo7b ayudan a investigar vías conservadas que vinculan la actividad de motores de actina con la morfogénesis epitelial y el mantenimiento tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Myosin VIIB (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Myo7b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Myo7b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Myo7b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Myosin VIIB.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Myo7b para la investigación de la señalización de Myosin VIIB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Myo7b críticos para la función de Myosin VIIB
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Myo7b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Myosin VIIB CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Myosin VIIB CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Myo7b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Myosin VIIB (m) y el plásmido HDR Myosin VIIB (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Myo7b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Myo7b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.