Myosin Id CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403425

概要

MYO1DはミオシンIdをコードしており、皮質細胞骨格の構築や膜ダイナミクスの制御に関与する、アクチン依存性の非典型的ミオシンです。MYO1Dはアクチンフィラメントや膜関連複合体との相互作用を介して、細胞極性、小胞輸送、運動性に関わる過程に寄与し、組織構築に影響を与えます。MYO1Dの発現量や機能の変化は、いくつかの状況において、上皮の組織化、遊走、腫瘍生物学に関連する細胞骨格リモデリングやシグナル伝達ネットワークの異常と結び付けられています。細胞周辺部における力学・化学変換のエフェクターとして、MYO1Dはアクチンダイナミクスを膜張力や方向性輸送に結び付ける役割の観点から研究されています。

Myosin Id CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYO1D遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYO1D内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYO1Dのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin Idタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin Idシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYO1D欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin Idの機能に不可欠なMYO1Dエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYO1Dゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin Id CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMyosin Id CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYO1D遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin Id HDRプラスミド（h）および Myosin Id HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYO1Dホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYO1D標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。