myomesin-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403165-ACT

MYOM2 kodiert Myomesin-2, einen wichtigen strukturellen Bestandteil der sarkomerischen M-Bande, der dicke Filamente quervernetzt und die Architektur der Myofibrillen in quergestreifter Muskulatur stabilisiert. Durch die Organisation der Ausrichtung von Myosinfilamenten und seinen Beitrag zur passiven Elastizität unterstützt Myomesin-2 eine effiziente Kraftübertragung während der Kontraktion sowie die Anpassung an mechanische Belastung. Die MYOM2-Expression und die Integrität der M-Bande sind mit Programmen der Sarkomerassemblierung und Mechanotransduktionsprozessen abgestimmt, die die Funktion von Kardiomyozyten und Skelettmuskel prägen. Veränderte sarkomerische Gerüststrukturen und eine Dysregulation von MYOM2 wurden mit erblichen Kardiomyopathien und myofibrillären Defekten in Verbindung gebracht, was MYOM2 für Studien zu Mechanismen von Muskelerkrankungen relevant macht.

myomesin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYOM2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

myomesin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYOM2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYOM2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen myomesin-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYOM2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von myomesin-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des myomesin-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYOM2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.