MyoD CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400092-ACT

MYOD1 kodiert den menschlichen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor MyoD, der als Masterregulator der Skelettmuskel-Myogenese fungiert. MyoD bindet an E-Box-Motive und wirkt mit Mitgliedern der MEF2-Familie sowie Chromatin-Remodelern zusammen, um Muskel-Linienprogramme zu aktivieren, den Austritt aus dem Zellzyklus zu koordinieren und die Differenzierung durch transkriptionelle Kontrolle myogener Struktur- und Stoffwechselgene zu fördern. Seine Aktivität ist mit Signaleingängen verknüpft, darunter Wnt/β-Catenin-, Notch-, TGF-β/SMAD- und MAPK-Signalwege, die die Festlegung und Reifung von Myoblasten feinabstimmen. Eine fehlregulierte MYOD1-Expression oder -Funktion wird als Marker eines veränderten myogenen Zustands verwendet und in Kontexten wie beeinträchtigter Regeneration, der Biologie von Muskelabbau sowie MYOD1-assoziierten Transkriptionsprogrammen in Rhabdomyosarkom-Modellen untersucht.

MyoD Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYOD1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MyoD Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYOD1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYOD1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MyoD-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYOD1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MyoD-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MyoD-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYOD1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.