Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYL9: sc-401577-ACT

MYL9 code la chaîne légère de la myosine 9, une chaîne légère régulatrice qui module l’activité motrice de la myosine II non musculaire via un contrôle, dépendant de la phosphorylation, de la contractilité actomyosine. Elle agit en aval des voies de signalisation RHOA/ROCK et Ca2+/calmoduline–MLCK pour influencer la formation des fibres de stress, la dynamique des adhésions focales, la cytokinèse et la tension des jonctions intercellulaires. En façonnant la mécanique du cytosquelette, MYL9 contribue à la migration cellulaire et à des programmes contractiles de type muscle lisse vasculaire dans des contextes stromaux et endothéliaux. Une contractilité associée à MYL9 dérégulée a été liée à des processus de remodelage pathologique pertinents pour la fibrose, les dysfonctions vasculaires et les modifications du microenvironnement tumoral.

MYL9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYL9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYL9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYL9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYL9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYL9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYL9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYL9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYL9 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYL9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.