Plásmido CRISPR de Activación (h) MYL10: sc-413972-ACT

MYL10 codifica la cadena ligera de miosina 10, un componente regulador del citoesqueleto de actomiosina que modula la actividad motora de la miosina y contribuye a la generación de fuerza. Mediante el control dependiente de la fosforilación de la función de la miosina II, MYL10 participa en procesos de remodelación del citoesqueleto que influyen en la forma celular, la contractilidad, la adhesión y la motilidad. Estos mecanismos se entrecruzan con vías que gobiernan la dinámica de la actina y la señalización contráctil dependiente de Rho/ROCK, lo que hace que MYL10 sea relevante para estudios sobre la organización tisular y los comportamientos celulares regulados por fuerzas mecánicas. La regulación alterada de la contractilidad del citoesqueleto se asocia con frecuencia a migración aberrante y fenotipos invasivos, lo que respalda la investigación de MYL10 en modelos relevantes de enfermedad donde la tensión actomiosínica está desregulada.

MYL10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYL10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYL10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYL10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYL10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYL10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYL10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYL10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYL10 en células tumorales con expresión de MYL10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.