MYH9 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421784-ACT

Myh9 kodiert die nichtmuskuläre Myosin‑Schwerkette IIA (MYH9), einen zentralen aktinbasierten Motor, der kontraktile Kräfte erzeugt und die kortikale Spannung, die Dynamik von Zelladhäsionen und die Zytokinese unterstützt. Die MYH9‑Aktivität ist mit der RhoA/ROCK‑Signalgebung, dem Umbau von Aktin‑Stressfasern und dem Turnover fokaler Adhäsionen verknüpft und reguliert so Zellpolarität, Migration und Mechanotransduktion. In Mausgeweben trägt Myh9 zur Funktion hämatopoetischer und Immunzellen, zur Integrität von Epithelien und zur entwicklungsbedingten Morphogenese bei und ist damit ein nützlicher Ansatzpunkt, um die zytoskelettale Kontrolle der Gewebearchitektur zu untersuchen. Eine fehlregulierte, MYH9‑abhängige Kontraktilität ist mit Defekten der Zellteilung und der Barrierefunktion verbunden und wird häufig in Modellen für Entzündung, Fibrose und krebsassoziierte Invasion untersucht.

MYH9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Myh9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MYH9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Myh9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Myh9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MYH9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Myh9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MYH9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MYH9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Myh9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.