MYH7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400383-ACT

MYH7 kodiert die β‑Myosin‑Schwerkette, ein zentrales sarkomerisches Motorprotein, das in quergestreifter Muskulatur dicke Filamente bildet und die Hydrolyse von ATP in mechanische Kraft umsetzt. Seine regulierte Interaktion mit Aktin und Myosin‑Leichtketten unterstützt die Kontraktilität, den Aufbau des Sarkomers und Mechanotransduktionsprogramme, die die Arbeitsbelastung mit transkriptionellen und metabolischen Anpassungen koppeln. Die MYH7‑Expression und das Isoform‑Gleichgewicht sind eng mit der Physiologie des Herzens und der langsam zuckenden Skelettmuskulatur verknüpft und greifen in Signalwege der Calcium‑Handhabung, hypertropher Signalgebung und des zytoskelettalen Remodelings ein. Genetische Varianten oder eine Fehlregulation von MYH7 sind stark mit erblichen Kardiomyopathien und Phänotypen der kontraktilen Dysfunktion assoziiert, die in humanen Zellsystemen breit modelliert werden.

MYH7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYH7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MYH7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYH7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYH7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MYH7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYH7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MYH7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MYH7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYH7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.