MYH10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401835

Übersicht

MYH10 kodiert nicht-muskelartiges Myosin IIB, ein aktinbasiertes Motorprotein, das in menschlichen Zellen kontraktile Kräfte erzeugt und den Umbau des Zytoskeletts unterstützt. Es ist an der Organisation des Aktomyosin-Netzwerks, der Zellmigration, Adhäsion, Zytokinese sowie der Aufrechterhaltung der Zellpolarität beteiligt, indem es Stressfasern und die Dynamik des kontraktilen Rings reguliert. Die MYH10-Funktion überschneidet sich mit Signalwegen, die Morphogenese und Mechanotransduktion steuern, und verknüpft Motoraktivität mit Veränderungen der Zellform und der Gewebearchitektur. Eine veränderte MYH10-Expression oder -Aktivität wird mit Defekten in Entwicklung und Zellteilung in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext fehlregulierter zytoskelettaler Dynamiken in Krebs- und neuroentwicklungsbezogenen Krankheitsmodellen untersucht.

Das MYH10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYH10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYH10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYH10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MYH10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYH10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MYH10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYH10-Exone abzielen, die für die MYH10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYH10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MYH10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MYH10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYH10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MYH10 HDR-Plasmid (h) und MYH10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYH10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYH10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.