MYBPC3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401409-ACT

MYBPC3 kodiert das kardiale Myosin-bindende Protein C, ein mit dem dicken Filament assoziiertes sarkomeres Protein, das den Aktin-Myosin-Querbrückenzyklus moduliert und zur Kontraktionskinetik in quergestreifter Muskulatur beiträgt. Über eine phosphorylierungsabhängige Regulation und Interaktionen innerhalb der A-Bande/C-Zone beeinflusst MYBPC3 die Kalziumhomöostase, den Aufbau der Myofibrillen sowie mechanische Signalwege, die die Funktion von Kardiomyozyten prägen. Genetische und expressionsbezogene Störungen von MYBPC3 sind stark mit erblichen Kardiomyopathien verknüpft, insbesondere mit der hypertrophen Kardiomyopathie, und werden zur Modellierung von Sarkomer-Dysfunktion und maladaptivem Remodeling genutzt. Als muskelspezifischer struktureller Regulator wird MYBPC3 häufig in iPSC-abgeleiteten Kardiomyozyten untersucht, um Sarkomerbiologie mit Stressantworten und energetischer Anpassung zu verbinden.

MYBPC3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYBPC3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MYBPC3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYBPC3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYBPC3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MYBPC3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYBPC3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MYBPC3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MYBPC3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYBPC3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.