Plásmido CRISPR de Activación (m) MYBBP1A: sc-422090-ACT

Mybbp1a codifica la proteína MYBBP1A del ratón (MYB-binding protein 1A), un corre-gulador transcripcional predominantemente nucleolar que integra la señalización asociada a la cromatina con la biogénesis ribosomal y el control del ciclo celular. Se ha descrito que MYBBP1A modula programas transcripcionales vinculados a la actividad de la ARN polimerasa I, a las respuestas al estrés nucleolar y a la regulación metabólica, influyendo en el crecimiento y la proliferación celulares. A través de interacciones con factores de transcripción y complejos modificadores de la cromatina, MYBBP1A puede afectar vías que gobiernan la diferenciación y la expresión génica adaptativa al estrés. La alteración de la expresión o la función de MYBBP1A se asocia con fenotipos de proliferación desregulada y de mantenimiento del genoma, relevantes para la biología del cáncer y otros contextos en los que la función nucleolar y la homeostasis transcripcional se encuentran perturbadas.

MYBBP1A El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mybbp1a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYBBP1A El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mybbp1a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mybbp1a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYBBP1A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mybbp1a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYBBP1A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYBBP1A en células tumorales con expresión de Mybbp1a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.