Mucin 17 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404622

Panoramica

MUC17 codifica la mucina 17, una mucina ancorata alla membrana e fortemente O-glicosilata, arricchita sulla superficie apicale delle cellule epiteliali gastrointestinali, dove sostiene la barriera mucosale e l’omeostasi dell’epitelio. La mucina 17 contribuisce all’idratazione della superficie cellulare, all’esclusione dei patogeni e alla protezione dallo stress meccanico e chimico, e può modulare l’adesione e la segnalazione cellulare attraverso interazioni nel glicocalice. Alterazioni dell’espressione di MUC17 e dei pattern di glicosilazione sono state riportate in disturbi infiammatori dell’intestino e in neoplasie epiteliali, collegando questa mucina a vie che regolano l’integrità della barriera, la differenziazione e le risposte allo stress. Come componente dell’interfaccia di difesa epiteliale, MUC17 è spesso studiata in modelli di infiammazione mucosale, interazioni ospite–microbo e cambiamenti dell’architettura delle glicoproteine associati ai tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 17 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MUC17 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MUC17 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MUC17 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mucin 17.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MUC17 per lo studio della segnalazione di Mucin 17, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MUC17 critici per la funzione di Mucin 17
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MUC17 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mucin 17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Mucin 17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MUC17. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mucin 17 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Mucin 17 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MUC17 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MUC17 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.