Plásmido Doble Nickase (h) Mts1: sc-401774-NIC

S100A4 codifica la proteína fijadora de calcio Mts1, un miembro de la familia S100 que actúa como regulador citosólico y extracelular de la motilidad celular y de la dinámica del citoesqueleto. Mts1 interactúa con dianas como la miosina II no muscular y modula procesos como la remodelación de actina, el recambio de las adhesiones focales y programas tipo transición epitelio‑mesénquima. A través de la señalización dependiente de calcio y de la interacción cruzada con vías que gobiernan la migración y la invasión, S100A4 se estudia con frecuencia en el contexto de la progresión tumoral, la fibrosis y los microambientes inflamatorios. La expresión desregulada de S100A4 también se asocia con cambios en la activación del estroma y el tráfico de células inmunitarias, lo que lo convierte en un nodo útil para desentrañar redes de señalización asociadas a la metástasis.

Mts1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus S100A4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de S100A4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de S100A4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con S100A4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.