MRP7 Double Nickase Plasmid (h): sc-406412-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MRP7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MRP7 Double-Nickase-Plasmid (h) und MRP7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ABCC10 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MRP7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406412-NIC | 20 µg | $410.00 |
ABCC10 kodiert den humanen ATP-bindenden Kassettentransporter MRP7 (ABCC10), eine Effluxpumpe der Plasmamembran, die unter Nutzung der ATP-Hydrolyse ein breites Spektrum an Xenobiotika und endogenen Metaboliten aus der Zelle exportiert. Die MRP7-Aktivität trägt zur zellulären Entgiftung bei und beeinflusst die intrazelluläre Arzneistoffverteilung; sie überschneidet sich dabei mit Signal- und Regulationswegen, die Membrantransport, Lipidstoffwechsel und zelluläre Stressantworten steuern. Eine dysregulierte Expression oder Funktion von ABCC10/MRP7 wurde in Krebsmodellen mit veränderten Chemoresistenz-Phänotypen sowie mit Variationen pharmakokinetischer Merkmale in Verbindung gebracht und ist daher relevant für Studien zur Transporterbiologie und zu Arzneistoff–Transporter-Interaktionen. Als Mitglied der ABCC-Unterfamilie bietet MRP7 zudem ein gut untersuchbares System, um zu analysieren, wie ABC-Transporter Barrierefunktionen und die gewebespezifische Verteilung kleiner Moleküle prägen.
MRP7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ABCC10-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ABCC10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ABCC10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ABCC10-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.