Plasmide Double Nickase (h) MRP2: sc-400601-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MRP2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MRP2 Double Nickase (h) et le plasmide MRP2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ABCC2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MRP2 Antibody (G-1): sc-518048
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MRP2 | sc-400601-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MRP2 | sc-400601-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCC2 code le transporteur humain de la famille des transporteurs ABC MRP2 (ABCC2), une pompe d’efflux apicale qui exporte, à travers des épithéliums polarisés, des conjugués du glutathion, du glucuronide et du sulfate, ainsi qu’un large éventail de xénobiotiques. MRP2 participe à la détoxification et à la formation de la bile en couplant l’hydrolyse de l’ATP au transport canaliculaire dans les hépatocytes, et contribue à la fonction de barrière dans l’intestin et le rein. En modulant l’exposition intracellulaire aux métabolites et aux médicaments, l’activité d’ABCC2 influence la pharmacocinétique et les réponses cellulaires au stress, en interagissant avec des voies qui contrôlent le stress oxydatif, le métabolisme de conjugaison et la signalisation inflammatoire. Une altération génétique ou fonctionnelle d’ABCC2 est associée à des phénotypes d’hyperbilirubinémie conjuguée tels que le syndrome de Dubin-Johnson, et ce transporteur est largement étudié pour son rôle dans le devenir des médicaments et les mécanismes de résistance multidrogue.
MRP2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ABCC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ABCC2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ABCC2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ABCC2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.