MRP1 Double Nickase Plasmid (m): sc-421613-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MRP1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MRP1 Double-Nickase-Plasmid (m) und MRP1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Abcc1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MRP1: sc-53130
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MRP1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421613-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRP1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421613-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Abcc1** kodiert das multidrug resistance-associated Protein 1 (MRP1/ABCC1), einen ATP-Bindungskassetten-Transporter, der ein breites Spektrum organischer Anionen, Glutathion- und Glucuronid-Konjugate sowie Lipidmediatoren über die Plasmamembran exportiert. MRP1 trägt zur zellulären Entgiftung und zur Redox-Homöostase bei, indem es den Efflux von Xenobiotika mit einem glutathionabhängigen Metabolismus koppelt, und beeinflusst die intrazelluläre Signalübertragung durch die Regulation des Transports von Leukotrienen und Prostaglandinen. Dieser Transporter ist in Signalwege eingebunden, die an oxidativen Stressantworten, entzündlicher Signalgebung und Barrierefunktion beteiligt sind, und wird in Krebsmodellen häufig im Zusammenhang mit Phänotypen der Multidrug-Resistenz untersucht. Abcc1 stellt zudem einen funktionellen Knotenpunkt dar, um pharmakokinetische Variabilität und gewebespezifische Transportprozesse in Maus-Systemen zu untersuchen.
MRP1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Abcc1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Abcc1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Abcc1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Abcc1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.