MRP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400456-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MRP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MRP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und MRP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ABCC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MRP1: sc-18835
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MRP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400456-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400456-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCC1 kodiert das humane Multidrug-Resistance-Associated Protein 1 (MRP1), einen ATP-Binding-Cassette-(ABC)-Transporter, der den ATP-abhängigen Efflux organischer Anionen, Xenobiotika sowie Glutathion-, Glucuronid- und Sulfat-konjugierter Metaboliten vermittelt. MRP1 trägt zur zellulären Entgiftung und zur Redox-Homöostase bei, indem es das intrazelluläre Glutathion-Gleichgewicht und den Transport von Leukotrien C4 sowie weiteren Entzündungsmediatoren reguliert. Über seine Rolle im Membrantransport und in Stressantwort-Signalwegen beeinflusst die ABCC1-Aktivität die intrazelluläre Verteilung von Arzneistoffen, den Umgang mit oxidativem Stress und Barrierefunktionen in unterschiedlichen Geweben. Eine fehlregulierte Expression oder Funktion von ABCC1/MRP1 wird häufig im Zusammenhang mit Multidrug-Resistance-Phänotypen, inflammatorischer Signalgebung und verändertem Metabolitentransport untersucht, wie sie in zahlreichen Krankheitsmodellen beobachtet werden.
MRP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ABCC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ABCC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ABCC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ABCC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.