MRGX2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-414107-ACT

MRGPRX2 kodiert den menschlichen Mas-related G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor X2 (MRGX2), einen GPCR, der stark in Mastzellen angereichert ist und eine IgE-unabhängige Aktivierung als Antwort auf verschiedene kationische Peptide und kleine Moleküle vermittelt. Die Rezeptorbindung löst Gαq/PLC-Signalübertragung, eine Mobilisierung von intrazellulärem Ca2+ sowie nachgeschaltete, mit MAPK und NF‑κB verknüpfte Transkriptionsprogramme aus, die Degranulation und die Freisetzung proinflammatorischer Mediatoren steuern. MRGX2 wird mit neuroimmuner Kommunikation und pseudoallergischen Reaktionen in Verbindung gebracht, und seine Dysregulation wird im Kontext chronischer Urtikaria, atopischer Entzündung und arzneimittelinduzierter, sofortiger Überempfindlichkeits-ähnlicher Reaktionen untersucht. Diese Eigenschaften machen MRGPRX2 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Aktivierungsschwellen von Mastzellen, rezeptorverzerrte (biased) Signalgebung und das Crosstalk entzündlicher Signalwege zu analysieren.

MRGX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MRGPRX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MRGX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MRGPRX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MRGPRX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MRGX2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MRGPRX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MRGX2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MRGX2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MRGPRX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.