Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
MRG1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421714
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MRG1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MRG1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MRG1 Anticuerpo (JA22): sc-21795
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MRG1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421714 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Cited2 codifica el corregulador transcripcional MRG1, una proteína nuclear que se une a CBP/p300 y modula programas de expresión génica que controlan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés celular en células de ratón. Al integrar señales de factores de transcripción sensibles a la hipoxia y de factores del desarrollo, MRG1 influye en los resultados transcripcionales dependientes de HIF y en una regulación más amplia de la especificación de linaje mediada por la cromatina. La actividad de Cited2 está vinculada a la embriogénesis y la organogénesis, y la regulación alterada de esta vía se ha asociado con defectos en el desarrollo cardiovascular y hematopoyético. Como regulador dependiente del contexto de redes transcripcionales, Cited2 se estudia con frecuencia en modelos de inflamación, estrés metabólico y biología tumoral, donde la disponibilidad de coactivadores y la señalización hipóxica determinan decisiones sobre el destino celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MRG1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cited2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cited2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cited2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MRG1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cited2 para la investigación de la señalización de MRG1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cited2 críticos para la función de MRG1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cited2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MRG1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MRG1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cited2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MRG1 (m) y el plásmido HDR MRG1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cited2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cited2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.