Plasmide CRISPR d'Activation (h) mPRδ: sc-413309-ACT

PAQR6 code le récepteur membranaire de la progestérone delta (mPRδ), un membre de la famille des récepteurs des progestatifs et AdipoQ, impliqué dans une signalisation stéroïdienne rapide, non génomique, au niveau des membranes cellulaires. mPRδ est associé à la modulation de voies de seconds messagers telles que la signalisation couplée aux protéines G, influençant les flux de calcium, la dynamique de l’AMPc et l’activité de kinases en aval, susceptibles d’orienter des décisions d’état cellulaire, notamment la prolifération, la migration et les réponses au stress. Dans les tissus humains, l’expression de PAQR6 a été associée à une biologie sensible aux hormones endocrines et à des réseaux de signalisation de la progestérone initiée à la membrane, qui recoupent la régulation métabolique et les processus inflammatoires. La dérégulation de la signalisation PAQR6/mPRδ a été étudiée dans le contexte de physiopathologies associées aux hormones et comme facteur contributif à des programmes cellulaires pertinents pour la biologie du cancer et la fonction du système reproducteur.

mPRδ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PAQR6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

mPRδ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PAQR6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PAQR6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de mPRδ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PAQR6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de mPRδ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie mPRδ dans les cellules tumorales présentant une expression de PAQR6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.