Plasmide Double Nickase (h) MPO/Myeloperoxidase: sc-400822-NIC

MPO code la myéloperoxydase, une peroxydase contenant un hème, stockée dans les granules azurophiles des neutrophiles et libérée lors de la dégranulation et de la formation de pièges extracellulaires des neutrophiles (NET). MPO catalyse la conversion du peroxyde d’hydrogène et du chlorure en acide hypochloreux et en oxydants réactifs apparentés, reliant l’explosion oxydative dépendante de la NADPH oxydase à la chimie effectrice antimicrobienne et à la signalisation rédox. Par l’oxydation des lipides, des protéines et des acides nucléiques, l’activité de MPO influence les cascades de signalisation inflammatoire, le dysfonctionnement endothélial et le recrutement des cellules immunitaires. Une expression ou une activité altérée de MPO a été associée à une immunité innée dérégulée et à des phénotypes de stress oxydatif pertinents pour la biologie des maladies inflammatoires et vasculaires, ainsi que pour des études du microenvironnement tumoral.

MPO/Myeloperoxidase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MPO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MPO. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MPO. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MPO.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.