Plasmide CRISPR d'Activation (h) MMP-8: sc-402089-ACT

Le gène humain **MMP8** code la métalloprotéinase matricielle 8 (MMP‑8), une endopeptidase sécrétée et zinc‑dépendante qui clive les collagènes fibrillaires ainsi que d’autres substrats de la matrice extracellulaire afin de réguler le remodelage tissulaire. L’activité de MMP‑8 s’intègre aux voies de signalisation inflammatoires et au recrutement des leucocytes, en interagissant avec l’organisation de la matrice extracellulaire, la maturation des chimiokines et les processus de réparation des plaies. Une expression dérégulée de MMP‑8 ou un déséquilibre protéolytique a été associé à des microenvironnements inflammatoires chroniques et à une dynamique stromale altérée dans des contextes tels que la maladie parodontale, l’arthrite et le remodelage associé aux tumeurs. En tant que protéase liée à des biomarqueurs dans les réponses immunitaires innées, MMP‑8 est fréquemment étudiée pour ses effets sur la migration cellulaire, l’intégrité des barrières et le renouvellement de la matrice.

MMP-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MMP8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MMP-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MMP8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MMP8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MMP-8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MMP8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MMP-8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MMP-8 dans les cellules tumorales présentant une expression de MMP8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.