Plásmido CRISPR de Activación (m) MLL3: sc-437348-ACT

Kmt2c codifica la metiltransferasa de histonas lisina‑N del ratón MLL3, un regulador de la cromatina con dominio SET que deposita la monometilación de H3K4 en los potenciadores (enhancers) y ayuda a coordinar la comunicación entre potenciador y promotor. MLL3 funciona en grandes complejos coactivadores de la transcripción, con funciones en la especificación de linaje, la señalización de receptores hormonales y la regulación de genes del desarrollo. A través de la modulación de la actividad de los potenciadores, influye en vías que controlan decisiones de destino celular, diferenciación y homeostasis tisular. La desregulación de los estados de cromatina y de los programas transcripcionales asociados a KMT2C/MLL3 se ha implicado en fenotipos relevantes para enfermedades, incluidos procesos de desarrollo alterados y una reprogramación oncogénica de la transcripción.

MLL3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Kmt2c sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MLL3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Kmt2c en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Kmt2c, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MLL3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Kmt2c y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MLL3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MLL3 en células tumorales con expresión de Kmt2c silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.