Plásmido CRISPR de Activación (h) MLL2: sc-401659-ACT

KMT2D (MLL2) codifica una metiltransferasa de lisina de histonas que contiene un dominio SET y cataliza la mono- y di-metilación de H3K4 en potenciadores (enhancers), configurando la accesibilidad de la cromatina y programas transcripcionales específicos de linaje. A través de interacciones con complejos tipo COMPASS, MLL2 coordina la activación de potenciadores, el reclutamiento de la ARN polimerasa II y la regulación génica de largo alcance, aspectos importantes para el desarrollo y la identidad celular. La alteración del control epigenético asociado a KMT2D se vincula con estados de diferenciación modificados, respuestas al daño en el ADN y una amplia desregulación transcripcional observada en múltiples contextos de cáncer y enfermedades del desarrollo. Como regulador de los paisajes de potenciadores, KMT2D se estudia ampliamente en vías que gobiernan la especificación del destino celular, la señalización inmunitaria y el control de la proliferación dependiente de la cromatina.

MLL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KMT2D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MLL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KMT2D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KMT2D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MLL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KMT2D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MLL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MLL2 en células tumorales con expresión de KMT2D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.