Plásmido CRISPR de Activación (h) MLL: sc-401307-ACT

KMT2A (MLL) codifica una metiltransferasa de lisina de histonas con dominio SET que cataliza la metilación de H3K4 para regular la accesibilidad de la cromatina y los programas transcripcionales que controlan el desarrollo hematopoyético y la especificación del destino celular. MLL actúa en grandes complejos nucleares que coordinan la “escritura” epigenética con la elongación transcripcional en promotores y potenciadores (enhancers), afectando vías como la regulación de los genes HOX, las respuestas al daño del ADN y la diferenciación. La desregulación de KMT2A, ya sea por cambios en su expresión o por reordenamientos genómicos, se asocia estrechamente con estados transcripcionales aberrantes en la leucemia y otras neoplasias, lo que convierte a MLL en un nodo central para estudiar el control epigenético de la expresión génica oncogénica. Su papel amplio en la regulación mediada por cromatina también respalda la investigación de efectos dependientes del contexto sobre la proliferación, el compromiso de linaje y la estabilidad de las redes transcripcionales en células humanas.

MLL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KMT2A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MLL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KMT2A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KMT2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MLL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KMT2A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MLL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MLL en células tumorales con expresión de KMT2A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.