Plásmido CRISPR de Activación (h) MLK3: sc-401781-ACT

MAP3K11 codifica la quinasa humana de linaje mixto 3 (MLK3), una MAP3K que integra diversas señales de estrés y citocinas aguas arriba con la señalización MAPK aguas abajo, incluidas las cascadas de JNK y p38. Mediante la fosforilación de MAP2K como MKK4/7 y MKK3/6, MLK3 contribuye a regular programas transcripcionales que controlan la inflamación, la apoptosis, la remodelación del citoesqueleto y la migración celular. La actividad de MLK3 se asocia a redes de señalización situadas aguas abajo de pequeñas GTPasas y de vías mediadas por receptores que moldean las respuestas celulares al estrés y las funciones efectoras de la inmunidad innata. La desregulación de la señalización MAP3K11/MLK3 se ha implicado en contextos patológicos que involucran una activación aberrante de MAPK, incluidas adaptaciones de señalización oncogénica y procesos neuroinflamatorios o neurodegenerativos.

MLK3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAP3K11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MLK3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAP3K11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAP3K11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MLK3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAP3K11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MLK3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MLK3 en células tumorales con expresión de MAP3K11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.