Particules Lentivirales d'Activation (h) MLK2: sc-406968-LAC

MAP3K10 code la mixed lineage kinase 2 (MLK2), une kinase kinase kinase de la voie MAP qui intègre des signaux de stress et d’inflammation en amont afin de réguler les cascades MAPK, en particulier les voies JNK et p38. Par la phosphorylation des MKK en aval, MLK2 influence des programmes transcriptionnels qui contrôlent l’apoptose, les réponses aux cytokines, la dynamique des neurites et le remodelage du cytosquelette. Une signalisation MLK2 dérégulée a été associée à une survie neuronale altérée et à des signaux inflammatoires modifiés, ce qui étaye sa pertinence pour la neurodégénérescence, l’adaptation des cellules cancéreuses au stress et des phénotypes liés à l’immunité dans des modèles humains. En tant que nœud de signalisation situé en amont de plusieurs branches des MAPK, MLK2 est souvent étudiée pour les interactions entre voies (crosstalk), l’activation de kinases dépendante du stimulus et des effets dépendants du contexte sur les décisions de destinée cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales MLK2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MAP3K10 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MLK2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MAP3K10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MLK2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MAP3K10 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.