Plásmido CRISPR de Activación (h) MLK2: sc-406968-ACT

El gen humano MAP3K10 codifica la quinasa de linaje mixto 2 (MLK2), una quinasa quinasa quinasa de MAP que integra señales ascendentes provenientes de pequeñas GTPasas y señales de estrés para propagar cascadas de fosforilación. MLK2 es un regulador clave de la señalización MAPK, en particular de las vías JNK y p38, y modela programas transcripcionales que controlan la apoptosis, las respuestas inflamatorias y la diferenciación neuronal. A través de estos nodos de señalización, MLK2 influye en la dinámica del citoesqueleto y en la adaptación celular al estrés, procesos que se investigan con frecuencia en biología del cáncer y en estudios de neurodegeneración. La actividad desregulada de MAP3K10 se ha asociado con señalización anómala activada por estrés y con vías de supervivencia alteradas, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de reconfiguración de rutas de señalización.

MLK2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAP3K10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MLK2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAP3K10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAP3K10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MLK2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAP3K10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MLK2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MLK2 en células tumorales con expresión de MAP3K10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.