MLH3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-432245-LAC

Mlh3 codifica MLH3, un omologo di MutL che si associa a MLH1 per supportare la riparazione degli appaiamenti errati del DNA (mismatch repair) e la ricombinazione meiotica, contribuendo a mantenere la stabilità del genoma. MLH3 partecipa all’elaborazione, legata alla riparazione, degli intermedi di ricombinazione ed è stato implicato nella formazione dei crossing-over durante la meiosi, influenzando la segregazione cromosomica e fenotipi legati alla fertilità. Attraverso i suoi ruoli nella sorveglianza degli errori di replicazione e nel controllo della ricombinazione, MLH3 si interseca con le vie che regolano le risposte al danno del DNA e la progressione del ciclo cellulare. Alterazioni dell’attività o della regolazione di MLH3 sono quindi rilevanti per studi su mutagenesi, instabilità cromosomica e meccanismi patologici associati al mismatch repair in modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale MLH3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Mlh3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MLH3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Mlh3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MLH3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Mlh3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.