Plasmide CRISPR/Cas9 KO MLF1 (m): sc-421659
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MLF1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MLF1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MLF1 Antibody (D-1): sc-514294
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MLF1 (m) | sc-421659 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin *Mlf1* code le facteur 1 de la leucémie myéloïde (MLF1), un régulateur conservé du comportement des cellules hématopoïétiques, impliqué dans le contrôle transcriptionnel et des processus liés au cycle cellulaire. MLF1 a été mis en cause dans la modulation de l’engagement de lignée et des réponses au stress cellulaire via des interactions avec des facteurs nucléaires qui influencent les programmes de prolifération et de différenciation. Une activité altérée de MLF1 est associée à une dérégulation de la biologie myéloïde et de voies pertinentes pour la leucémogenèse, ce qui en fait un point d’entrée utile pour étudier les mécanismes reliant la régulation transcriptionnelle au contrôle de la croissance. Dans les systèmes expérimentaux, la perturbation de *Mlf1* peut aider à déterminer comment les états des cellules hématopoïétiques et immunitaires sont stabilisés ou déstabilisés sous l’effet de signaux oncogéniques ou de différenciation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MLF1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mlf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mlf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mlf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MLF1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mlf1 pour l'étude de la signalisation de MLF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Mlf1 essentiels à la fonction de MLF1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mlf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MLF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MLF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mlf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MLF1 plasmide HDR (m) et le MLF1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mlf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mlf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.