MLF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417753

Panoramica

Il fattore 1 della leucemia mieloide (MLF1) è un regolatore conservato del destino delle cellule ematopoietiche che si localizza sia nel citoplasma sia nel nucleo e partecipa a interazioni proteina–proteina che influenzano i programmi trascrizionali e il controllo del ciclo cellulare. È stato collegato alla differenziazione mieloide e alla segnalazione in risposta allo stress, con ruoli riportati nella modulazione della suscettibilità all’apoptosi e della capacità proliferativa nelle cellule già impegnate in una specifica linea di differenziamento. Un’alterazione dell’espressione di MLF1 o una sua errata localizzazione è stata associata alla biologia delle neoplasie ematologiche, inclusi contesti di trasformazione leucemica in cui i checkpoint di differenziazione e crescita risultano compromessi. Di conseguenza, MLF1 rappresenta un nodo utile per studiare le vie che collegano la regolazione trascrizionale alla proliferazione e alla differenziazione nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MLF1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MLF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MLF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MLF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MLF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MLF1 per lo studio della segnalazione di MLF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MLF1 critici per la funzione di MLF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MLF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MLF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MLF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MLF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MLF1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MLF1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MLF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MLF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.