Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MKP-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405872
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MKP-4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MKP-4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MKP-4 Antibody (D-3): sc-137010
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MKP-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405872 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DUSP9 codifica la fosfatasi a doppia specificità 9 (MKP-4), una fosfatasi delle MAPK che defosforila i residui di treonina e tirosina nelle MAP chinasi attivate, attenuandone l’output di segnalazione. MKP-4 è implicata nel controllo a feedback negativo delle cascate ERK e p38, influenzando la proliferazione e la differenziazione cellulare, nonché programmi trascrizionali responsivi allo stress. Limitando durata e ampiezza dell’attivazione della via MAPK, DUSP9 contribuisce alla regolazione della segnalazione infiammatoria e delle decisioni di destino cellulare in molteplici contesti tissutali. Un’attività deregolata di DUSP9/MKP-4 è stata associata a fenotipi di segnalazione MAPK alterati osservati in ambito oncologico, nella regolazione metabolica e in modelli di malattie infiammatorie, rendendola rilevante per studi meccanicistici delle vie di segnalazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DUSP9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DUSP9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DUSP9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MKP-4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DUSP9 per lo studio della segnalazione di MKP-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DUSP9 critici per la funzione di MKP-4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DUSP9 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MKP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MKP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DUSP9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MKP-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MKP-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DUSP9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DUSP9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.