Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-4 (h): sc-405872
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MKP-4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MKP-4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MKP-4 Antibody (D-3): sc-137010
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-4 (h) | sc-405872 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
DUSP9 code la phosphatase à double spécificité 9 (MKP-4), une phosphatase des MAPK qui déphosphoryle des résidus thréonine et tyrosine sur des kinases MAP activées afin d’atténuer l’intensité de la signalisation. MKP-4 est impliquée dans le contrôle par rétroaction négative des cascades ERK et p38, influençant la prolifération et la différenciation cellulaires ainsi que des programmes transcriptionnels sensibles au stress. En limitant la durée et l’amplitude d’activation de la voie MAPK, DUSP9 contribue à la régulation de la signalisation inflammatoire et aux décisions de destinée cellulaire dans divers contextes tissulaires. Une activité DUSP9/MKP-4 dérégulée a été associée à des phénotypes de signalisation MAPK altérés observés en oncologie, dans la régulation métabolique et dans des modèles de maladies inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies de signalisation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DUSP9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DUSP9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DUSP9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MKP-4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DUSP9 pour l'étude de la signalisation de MKP-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DUSP9 essentiels à la fonction de MKP-4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DUSP9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MKP-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MKP-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DUSP9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MKP-4 plasmide HDR (h) et le MKP-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DUSP9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DUSP9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.