Plasmide CRISPR d'Activation (h) Miz-1: sc-402110-ACT

ZBTB17 code le facteur de transcription Miz-1, une protéine à doigts de zinc de type BTB/POZ qui se lie aux éléments initiateurs et coordonne des programmes transcriptionnels dépendants du contexte contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. Miz-1 intègre les signaux à la régulation transcriptionnelle grâce à des interactions avec des cofacteurs tels que MYC et des complexes de modification de la chromatine, modulant ainsi l’expression de gènes incluant CDKN1A/p21 et d’autres régulateurs associés aux points de contrôle. Par l’intermédiaire de ces réseaux, Miz-1 influence l’équilibre prolifération–apoptose et l’expression génique spécifique de lignée, faisant de ZBTB17 un nœud utile pour l’étude du contrôle transcriptionnel dans des contextes oncogéniques et développementaux. La dérégulation de circuits transcriptionnels centrés sur Miz-1 a été associée à des altérations des points de contrôle du cycle cellulaire et à des phénotypes de croissance aberrants pertinents pour la biologie du cancer et la régulation hématopoïétique.

Miz-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZBTB17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Miz-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZBTB17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZBTB17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Miz-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZBTB17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Miz-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Miz-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZBTB17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.