Miz-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402110-ACT

ZBTB17 codifica il fattore di trascrizione Miz-1, una proteina a dita di zinco BTB/POZ che si lega agli elementi iniziatori e coordina programmi trascrizionali dipendenti dal contesto che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress. Miz-1 integra la segnalazione con la regolazione trascrizionale attraverso interazioni con cofattori come MYC e complessi di modificazione della cromatina, modulando così l’espressione di geni tra cui CDKN1A/p21 e altri regolatori associati ai checkpoint. Attraverso queste reti, Miz-1 influenza l’equilibrio tra proliferazione e apoptosi e l’espressione genica specifica di linea, rendendo ZBTB17 un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale in contesti oncogenici e di sviluppo. La deregolazione di circuiti trascrizionali centrati su Miz-1 è stata collegata ad alterazioni dei checkpoint del ciclo cellulare e a fenotipi di crescita aberranti rilevanti per la biologia del cancro e la regolazione ematopoietica.

Miz-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZBTB17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Miz-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZBTB17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZBTB17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Miz-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZBTB17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Miz-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Miz-1 nelle cellule tumorali con espressione di ZBTB17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.