MIP-3β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403239

Übersicht

CCL19 kodiert das Chemokin MIP-3β (auch als CCL19 bekannt), einen CCR7-Liganden, der die Chemotaxis naiver T‑Zellen, zentraler Gedächtnis‑T‑Zellen und reifer dendritischer Zellen in Richtung lymphoider Gewebe steuert. Durch die Prägung des Leukozyten-Traffickings unterstützt es das Homing in Lymphknoten, die Bildung immunologischer Synapsen und eine koordinierte Antigenpräsentation innerhalb der T‑Zell-Zone. Die MIP-3β–CCR7-Signalgebung greift in GPCR-vermittelte Signalwege ein, die Zytoskelettumbau, Adhäsion und migratorische Polarisierung regulieren, und beeinflusst damit Architektur und Funktion sekundärer lymphoider Organe. Eine dysregulierte CCL19-Expression oder -Signalübertragung wurde mit veränderten Mustern der Immunzellinfiltration bei chronischer Entzündung, Autoimmunität und in Tumormikroumgebungen in Verbindung gebracht, was CCL19 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in der Immunologie macht.

Das MIP-3β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CCL19-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CCL19-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CCL19 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MIP-3β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CCL19-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MIP-3β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CCL19-Exone abzielen, die für die MIP-3β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CCL19-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MIP-3β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MIP-3β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CCL19-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MIP-3β HDR-Plasmid (h) und MIP-3β HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CCL19-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CCL19-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.