Plásmido CRISPR de Activación (h) MIP-3β: sc-403239-ACT

CCL19 codifica la proteína inflamatoria de macrófagos 3β (MIP-3β), una quimiocina CC que se une a CCR7 para dirigir la quimiotaxis de células T, células B y células dendríticas maduras. Este eje ligando–receptor ayuda a establecer la organización del tejido linfoide y regula el tráfico de células inmunitarias hacia los órganos linfoides secundarios, integrándose con redes de señalización inflamatoria que moldean la presentación de antígenos y el cebado de la inmunidad adaptativa. La señalización de CCR7 inducida por CCL19 influye en la remodelación del citoesqueleto y en programas migratorios, afectando el posicionamiento de los leucocitos dentro de los microambientes de los ganglios linfáticos. La actividad desregulada de CCL19/CCR7 se ha implicado en estados inflamatorios crónicos y en el reclutamiento de células inmunitarias asociado a tumores, por lo que es relevante para estudios de infiltración inmunitaria y del crosstalk del microambiente.

MIP-3β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCL19 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MIP-3β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCL19 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCL19, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MIP-3β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCL19 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MIP-3β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MIP-3β en células tumorales con expresión de CCL19 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.