Plasmide CRISPR/Cas9 KO MIA (h): sc-404978
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MIA Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MIA, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MIA Antibody (C-10): sc-377375
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MIA (h) | sc-404978 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
La MIA humaine (melanoma inhibitory activity) code une protéine sécrétée interagissant avec la matrice extracellulaire, impliquée dans la régulation de l’adhérence cellulaire, de la migration et du remodelage tissulaire. MIA peut moduler la signalisation dépendante des intégrines et de la matrice, et influencer la dynamique du cytosquelette qui façonne les phénotypes invasifs et les réponses cellulaires au stress. Une expression altérée de MIA a été rapportée dans le mélanome et d’autres cancers, où elle est fréquemment étudiée comme médiateur dépendant du contexte des interactions entre tumeur et microenvironnement ainsi que du comportement métastatique. En tant que facteur soluble, MIA est également utilisée pour étudier la signalisation paracrine et les dépendances à des voies extracellulaires dans des modèles cellulaires.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MIA (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MIA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MIA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MIA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MIA.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MIA pour l'étude de la signalisation de MIA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de MIA essentiels à la fonction de MIA
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MIA pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MIA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MIA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MIA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MIA plasmide HDR (h) et le MIA (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MIA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MIA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.