MFSD2 Double Nickase Plasmid (m): sc-429366-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MFSD2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MFSD2 Double-Nickase-Plasmid (m) und MFSD2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Mfsd2a abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MFSD2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-429366-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mfsd2a kodiert MFSD2A, einen Mehrfachmembrantransporter der Major-Facilitator-Superfamily, der in Endothelbarrieren stark angereichert ist und zum Lipid- und Nährstofftransport über spezialisierte vaskuläre Grenzflächen beiträgt. In der Maus ist MFSD2A vor allem dafür bekannt, die Transzytose im mikrovaskulären Endothel des Gehirns zu regulieren, die Integrität der Blut-Hirn-Schranke zu unterstützen und die ZNS-Homöostase zu beeinflussen. Über seine Rolle im Membrantransport und in der Kontrolle des vesikulären Traffickings wirkt MFSD2A auf Signalwege des Lipidstoffwechsels sowie auf zelluläre Barrierefunktionen, die für Modelle der Neuroentwicklung und Neuroinflammation relevant sind. Eine veränderte MFSD2A-Aktivität wurde mit Barriere-Dysfunktionsphänotypen und Mechanismen neurologischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Endothel-Transportbiologie und der ZNS-relevanten metabolischen Regulation macht.
MFSD2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Mfsd2a-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Mfsd2a abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Mfsd2a-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Mfsd2a-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.